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2015年ELISA試劑盒質(zhì)量管理--儀器質(zhì)控研究
更新時(shí)間:2015-04-13   點(diǎn)擊次數(shù):909次

    為使儀器保持*工作狀態(tài)應(yīng)建立維護(hù)和校正儀器的標(biāo)準(zhǔn)操作程序(SOP),所要控制的儀器包括移液器(加樣槍),水浴箱(溫箱),洗板機(jī)和酶標(biāo)儀。
    ◎移液器:ELISA加樣量小(5-100ul),其準(zhǔn)確性直接影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果,利用稱重法檢查:吸取刻度指示量的水,萬分之一天平稱重后計(jì)算吸量是否準(zhǔn)確,一般應(yīng)在±10%以內(nèi);
◎水浴箱 經(jīng)常檢查水浴箱溫度計(jì)所示的溫度和水中(或溫箱內(nèi))實(shí)測溫度是否一致,ELISA試劑盒允許有±1℃的誤差;
    ◎洗板機(jī) 每個(gè)廠家設(shè)置洗板后的殘留液有各自的規(guī)定一般不超過2ul ,人工扣板時(shí),墊紙不濕,定期檢查管孔是否堵塞;
◎酶標(biāo)儀 經(jīng)常維護(hù)其光學(xué)部分,防止濾光片霉變,ELISA試劑盒定期檢測校正,使其保持良好的工作性能。

附1:酶標(biāo)儀校正程序
◎?yàn)V光片波長精度檢查:將不同波長的濾光片從酶標(biāo)儀上卸下,用UV-2201型紫外-可見分光光度計(jì)(波長精度±0.3nm)于可見光區(qū)對每個(gè)濾光片進(jìn)行掃描,其檢測值與標(biāo)定值之差為濾光片波長精度。
◎通噵差與孔間差檢測:通道差檢測是取一只酶標(biāo)板小孔杯(杯底須光滑,透明,無污染以酶標(biāo)板架作載體, ELISA試劑盒將其(內(nèi)含200ul甲基橙溶液吸光度調(diào)至0.500A左右)置于8個(gè)通道的相應(yīng)位置,蒸溜水調(diào)零,1于490nm處連續(xù)測三次,觀察其不同通道的檢測器測量結(jié)果的一致性,可用極差值來表示??组g差的測量是選擇同一廠家,同一批號酶標(biāo)2板條(8條共96孔)分別加入200ul甲基橙溶液(吸光度調(diào)至0.100A左右)先后置于同一通道,蒸溜水調(diào)零,于490nm處檢測,其誤差大小用±1.96s衡量。
n 零點(diǎn)飄移(穩(wěn)定性觀察):取8只小孔杯分別置于8個(gè)通道的相應(yīng)位置,均加入200ul蒸溜水并調(diào)零,于490nm處每隔30分鐘測一次,觀察各個(gè)通道4小時(shí)內(nèi)吸光度的變化。

◎精密度評價(jià):每個(gè)通道3只小杯分別加入200ul高中低3種不同.濃度的甲基橙溶解,蒸溜水調(diào)零,于490nm作雙份平行測定,每日測二次(上下午各一次),連續(xù)測定20天。分別計(jì)算其批內(nèi)精密度,日內(nèi)批精密度,日間精密度和總精密度及相應(yīng)的CV值。
◎線性測定:用電子天平稱取甲基橙配制5個(gè)系列的溶液,于490nm平行測8次,取其均值。計(jì)算其回歸方程,相關(guān)系數(shù)及標(biāo)準(zhǔn)估計(jì)誤差s,并用±1.96s表示樣品測量的誤差范圍.ELISA試劑盒雙波長測定評價(jià):取一分甲基橙溶液,分別加入3種不同濃度的溶血液(測定波長為490nm,校正波長為585nm),先后于8個(gè)通道檢測,每個(gè)通道測3次,比較各組之間是否具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異,以考察雙波長消除干擾組分的效果。
◎一般酶標(biāo)儀無585nm濾光片,可選用550nm或630nm濾光片。450nm 濾光片的檢定選用普魯蘭溶液(校正波長為630nm)。

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